Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中渐渐扩展

从第一次注意到胰脏自身抗质到注意到1型号白血病医学副作用的令人满意率在成年人初期就有良好的描绘，多个胰脏自身抗质白血病的成年人里面有70%在血清转换后10周内患病白血病，而随访15年的成年人这一数目上升到84%。相尤其之下，占医学1型号白血病一半以上的型号1型号白血病的肺癌系统对还无法给与充分的研究工作。

愈来愈多的人开始适用分期系统对来下定义1型号白血病的令人满意：变异在注意到多种胰脏自身抗质时离开第1之前，注意到血糖诱发时离开第2之前，注意到副作用时离开第3之前。一些多发胰脏自身抗质白血病的变异，在1期和2期，令人满意较迟，并发展为肺癌的1型号白血病。我们之后描绘了各别在首次验证到多种胰脏自身抗质抽取后数10年无白血病的极迟令人满意者，这组成员病人人数少，但不同之处相当一致。随后，我们见到胰脏自身蛋白特异性CD8+T细胞内反理应在令人满意加速的病人里面大体上不存在，但在全面性肺癌和长期存在的白血病病人里面很容易验证到。这可能断定，与令人满意病人相尤其，这些病人致病反理应的调节加强。

早期研究工作断定，尽管调节性T细胞内(Treg)数目正常人，但白血病病人存在一些系统对缺点，其里面都有对IL-2的反理应战斗能力降低。此外，白血病病人里面的效理应CD4+T细胞内可能对调节格外为重要抵抗性，展示出为效理应T细胞内的选择性移向，自然地导致的Treg和质外导致的游离Treg，以及蛋白经历的CD4+T细胞内里面IL-2反理应移向。本研究工作的目的是描绘了CD4+调节性T细胞内(Treg)在领头极加速令人满意者里面的不同之处，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群相结合的纵向研究工作，在21岁表列确诊的病人亲属里面体检1型号白血病的危险因素。我们之后描绘了长期加速令人满意者的不同之处，他们保持稳定多重胰脏自身抗质白血病超过10年，但无法注意到白血病的医学副作用，迟性或非开展性致病。随后，10名继续保持稳定无白血病并愿意都有大量尿液抽取的加速令人满意者纳入T和B细胞内系统对研究工作。在目前的研究工作里面，8名迟令人满意者(SP组成员)，里面位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身抗质白血病。所有的参加者都西北面1型号白血病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗质对某些蛋白的白血病反理应，然而，一名病人已经西北面2期数6年，但无法注意到医学副作用，一名病人被诊断为白血病，该受试者72岁，在采集试验中抽取时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据研究工作里面对该供质开展了单独审计。分离出来外周血单个核细胞内(PBMCs)，有别于多参数流式细胞内拳法和T细胞内选择性试验中审计供质里面Treg的振幅、表观号和系统对。适用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和回归)开展无监督聚类研究工作，审计Treg表观号。

结果：与生活品质供质相尤其，来自迟令人满意质的思绪CD4+T细胞内的监督聚类断定，游离的思绪CD4+ Treg振幅上升，与止痛药游离的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来上升有关。一名HbA1c上升时的病人与令人满意加速者和匹配的比对组成员相尤其，Treg谱各不相同。系统对研究工作断定，与生活品质供质相尤其，来自加速令人满意质的Treg游离的CD4+效理应T细胞内选择性明显受损。展示出为对效理应CD4+T细胞内CD25和CD134表达出来的选择性上升。

三幅1 深入的表观号研究工作断定，CD4+Treg亚型号在迟令人满意字段里面上升。由FlowSOM分解成的Treg四楼，聚集在来自所有供质的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据上标物表达出来认定出10个元簇:思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)适用9个不同Treg上标分解成的10个元簇的MST。每个路由表代表一个战斗群(100个战斗群)，格外大的元战斗群(10个元战斗群)在路由表组成员四周上色。每个路由表里面的饼三幅暗示单个上标的表达出来级别。(b)每个元聚类的热三幅，以断定整质上标表达出来。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)分解成三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起重元素为每个metacluster木箱两条路线三幅(重元素> 0.05%)相符为HD和SP组成员:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞内(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞内(l)。浅黄色左上角代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩化验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 适用CITRUS的预测模型号表明，Treg振幅的上升是令人满意加速的标志。分级制度除此以外(a - f)和玉米研究工作(g-k)尤其SP参加者和匹配的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的代表性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来开展分离出来，模拟FlowSOM群质。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)组成员以及供质SP 606(浅黄色)里面CD25+ cd127的振幅概要三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外空集的木箱两条路线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度上色，上标引人注目的簇被识别为SP和HD字段之间的不同。(j)木箱两条路线三幅断定了在SP(黑纹)和HD(灰点)组成员里面，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的比起重元素(数目)。(k)直方三幅断定每个簇的表观号(黑色)和Treg上标比起表达出来与背景表达出来(黄色);上列，寄存器Treg_3;请注意四人，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇里面上标的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩化验

三幅3 与生活品质献血者相尤其，令人满意加速者思绪treg的GITR上升。每个思绪CD4+T细胞内元簇(思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表达出来上标的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的表达出来热三幅(sp606不都有在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(浅黄色)的FlowSOM GITR表达出来相联，断定直方三幅(c)和概要三幅(d)。Wilcoxon相加符号秩和化验，p< 0.07(浅黄色)所有供质都有，p< 0.05(黄色)供质SP 606和匹配的HD不都有在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR表达出来，从分级制度除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(浅黄色)相联，断定直方三幅(e)和概要三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加符号秩化验

三幅4 来自加速令人满意的CD4+ treg细胞内控制效理应CD4+T细胞内的战斗能力降低。SP组成员用黄色的两条路线和左上角暗示，HD组成员用黑色的两条路线和左上角暗示，浅黄色的两条路线/左上角暗示供质sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内开展分选。CD4+CD25−(理需要的话者)被上标为CFSE, Treg按仔细观察的数目起始。用抗CD3 /28微珠游离细胞内，人才培养3天后开展流式细胞内拳法验证。(a-d)与CD4+理需要的话者比起理应的treg人才培养(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD理需要的话者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性一般而言。适用白血病比对(游离的响理应细胞内不含treg)计算选择性一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究工作。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

三幅5 效理应CD4+T细胞内对加速令人满意的T细胞内游离的选择性格外敏感性。SP组成员用黄色的两条路线和左上角暗示，HD组成员用黑色的两条路线和左上角暗示，浅黄色的两条路线/左上角暗示供质sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内开展分选。CD4+CD25−(理需要的话者)被cfsel上标，treg按仔细观察的数目起始。用抗CD3 /28微珠游离细胞内，人才培养3天后开展流式细胞内拳法(CD25反染)和细胞内因姪研究工作。HD Treg与HD、SP或sp606理需要的话者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性调升(b)。(c,d) CD25选择性调升(c)和CD134选择性调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养里面的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究工作。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

假设：我们推断的假设是，来自加速令人满意姪的游离思绪CD4+Treg在GITR表达出来里面给与了扩展和珍贵，凸显了进一步研究工作Treg在1型号白血病风险变异里面的异质性的实质。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28